Micropulser快速操作指南
信息来源:   时间:2015-07-17   点击次数:

MicroPulser系统设置
1.连接MicroPulser系统电源。
2.把MicroPulser下侧向下折的脚取下,将其插入电击腔的轨道中。把电击腔滑块插入电击腔。
3.把电击腔与MicroPulser前方面板上的插孔;电传孔过程中电极的极性并不重要。
4.打开设备右侧后方的电源开关。LED灯亮,屏幕显示“Ec1”,LED进入Bacteria Settings。

MicroPulser的操作
1.选择预设程序
MicroPulser中预设了一些常用来做电传孔的微生物的程序。下面是细菌和真菌的电转条件:
细菌电转条件:
程序代号            微生物                                                    参数
                                                            电压(kV)   电击次数      时间常数(毫秒)
Ec1        E. coli (0.1 cm cuvette)                     1.8            1                 -
Ec2        E. coli (0.2 cm cuvette)                     2.5            1                 -
StA        S. aureus (0,2 cm cuvette)                1.8            1                2.5
Agr        A. tumefaciens (0.1 cm cuvette)         2.2            1                 -
Ec3        E. coli (0.2 cm cuvette)                     3.0            1                 -
真菌电转条件:
程序代号            微生物                                            参数
                                                             电压(kV)   电击次数      时间常数(毫秒)
Sc2        S. cerevisiae (0.2 cm cuvette)             1.5            1                 -
Sc4        S. cerevisiae (0.2 cm cuvette)             3.0            1                 -
ShS        S. pombe (0.2 cm cuvette)                2.0            1                 -
dic        D. discoideum (0.4 cm cuvette)           1.0            2                 1.0
Pic        P. pastoris (0.2 cm cuvette)                 2.0            1                  -
点击Settings按钮,在Bacteria,Fungi和Manual之间进行设置。当LED显示Fungi时,真菌的电转程序将显示出来。点击Raise和Lower可在不同程序之间进行选择。当程序代号显示时,其相关参数将自动被选择。细菌电转程序的选择同上。
当选中某一个程序时,同时点击Raised和Lower按钮,可在LED中显示该程序的参数。LED首先显示电压值,然后在“t”后显示时间常数,如果程序中有时间和多次电击设置,将在“2”后显示“P”,表示设置了两次连续的电击。如果没有“t”设置,电击将不会被终结,如果无“P”设置,则只有一次设置。
2.手动方式使用MicroPulser
A.改变电压
点击Settings按钮,使LED显示Manual。此时LED显示电压(kV)。点击Raised和Lower按钮可在0.20kV至3.00kV之间进行选择。如果仪器刚打开,则LED显示0.00。
B.中断电击
当手动模式显示时,同时点击Raised和Lower按钮。LED将显示“t—”并显示所选择的电击时间。当电源打开时,默认的设置是标准的指数衰减脉冲,或无脉冲中断,用两个破折号表示。单独放开Lower按钮,LED将显示以毫秒显示中断脉冲时间。LED最初显示“t1.0”,然后每次增加0.1毫秒,最后可至“t4.0”。此设置可使指数脉冲在1至4毫秒之间被中断。同时点击Raised和Lower按钮,然后单独释放Raised按钮,可降低中断时间。
3.执行电击
点击Pulse按钮可使电容充电至设定电压。此过程中,LED将显示“PLS”。当脉冲释放时,仪器会发出声响。在一个设定过程中有多次脉冲时,“PLS”将在整个过程中显示,并且每一次脉冲释放时都回发出声响。手动释放多次脉冲时,可在第一次电击发出声响后,再次点击电击按钮进行电击。
4.电击结果检测
点击Measurements按钮,LED显示“Actual kV”。此显示为最后一次电击中实际的电压(kV)输出。如果仪器刚打开电源或没有执行电击,LED将显示“0.00”。再点击Measurements,LED将显示“Time ms”。此显示为最后一次电击的时间常数(msec)。如果仪器刚打开电源或没有执行电击,LED将显示“0.00”。一直按住Measurements按钮可在实际电压和时间常数之间切换。

用MicroPulser进行电穿孔
1.把细胞悬液转移进电击杯中,弹动液体使其进入杯底部。在0.2cm点击杯中可最多装入0.4ml的悬液,0.1cm杯中装入最多80μl悬液。注意:温度对电转效率有很大影响,一些微生物,如大肠杆菌和酿酒酵母在预冷的电击杯中电转效率更高。
2.把电击杯插入电击腔的滑动块中,把滑动块推到电击腔里直到电击杯与电击腔的电极紧密接触。
3.电击Pulse按钮进行电容充电并发出电击;LED将显示“PLS”直至电击执行,仪器发出声响。此后LED将显示程序,时间常数或实际的电压输出。
4.把滑动块从腔中取出,拿出电击杯,继续处理样品。
5.点击Measurements按钮,LED显示“Actual kV”。再点击Measurements,LED将显示“Time ms”。
6.关掉仪器电源,此时可断开电击腔与仪器的连接。在连线拿掉后方可拿掉电击腔的盖子。