如果没有液相层析仪系统，则可以使用注射器来给裂解液和缓冲液上样。我们建议您使用容积不少于20ml的针筒。一倍柱体积（CV）相当于一体积树脂（1CV=1ml，1ml层析柱）。
在样品上柱前留出少量的裂解液，在后面的分析中（如：SDS-PAGE），这部分样品将作为对照泳道上样。

缓冲液准备

1．冲洗缓冲液（0.1M磷酸钠，pH7.2）。
要避免缓冲液中含NaCl。配好的缓冲液放置于4℃保存。
2．洗脱缓冲液（0.1M磷酸钠，0.1M氟化钠，pH7.2）。
使用注射器时，洗脱缓冲液需保存在4℃。
3．清洗缓冲液（0.1M磷酸）。
4．保存缓冲液（0.02%叠氮化钠，0.1M磷酸钠，pH7.2）。

上样和冲洗
5．从柱子端部拿掉塞子，保存好这些塞子，备用。
6．用10倍柱体积冲洗缓冲液平衡柱子。
    因为保存缓冲液中含有0.02%的叠氮化钠用来抑菌，为了去除叠氮化物对离子的激发作
用，这步预平衡是必须的。使针筒充满冲洗缓冲液，插入柱子并把所有缓冲液推入柱子。
7．预冷（4℃）的细胞裂解液上柱。
    使针筒充满裂解液，插入柱子并把所有裂解液推入柱子。对于1ml柱子，可以上5ml的裂解液。
8．用15倍柱体积冲洗缓冲液冲洗柱子。
使冲洗缓冲液充满针筒，插入柱子并把所有的缓冲液推入柱子。这步可以根据纯化蛋白的需要增加额外的冲洗步骤。

洗脱
9．使针筒充满6倍柱体积的洗脱缓冲液，先把1.5倍柱体积的洗脱缓冲液上柱。
    收集1.5倍柱体积的流出液，每部分0.5倍柱体积，对其进行分析。在第二部分收集液中通常会含有一些纯化的蛋白。
    针筒也可以留在柱子上，用塞子塞住出口。
10．在室温下，用洗脱缓冲液孵育柱子至少30分钟。
如果在4℃下孵育，则至少孵育12小时。
11．5倍柱体积洗脱缓冲液上柱。
通常大量的蛋白会在前面五部分洗脱缓冲液中被洗脱出来。

清洗
12．用至少5倍柱体积的冲洗缓冲液冲洗柱子。
13．用3倍柱体积的清洗缓冲液清洗柱子。
14．用5倍柱体积冲洗缓冲液平衡柱子。
15．用2倍柱体积保存缓冲液平衡柱子；盖好柱子并保存于4℃。