MyIQ 荧光定量PCR仪的操作快速指南
信息来源:   时间:2015-07-24   点击次数:

1.接通MyIQ的电源,实验前先让系统预热30分钟。打开电脑,启动MyIQ的软件,并点击Yes和OK注册登陆。
2.在0.2ml的薄壁PCR反应管内加入PCR反应试剂和待测样本,并盖上盖子。(若使用96孔板,则用光学级封带封口),注意,必须带一次性塑料手套,不要让手指接触到反应管表面。将反应管按顺序放入仪器的加热孔中。
3.点击软件Protocol Workshop功能模块,设置PCR热循环的程序(thermal protocol),包括温度、时间、循环次数等参数的设置。


热循环设置完后,必须选择在哪一步骤进行荧光采集。双击下图中的图标,看到黄灯并有“REAL-TIME“出现,表明仪器在该步骤实时采集和分析荧光信号。
给出热循环文件名,点击‘Save this protocol’,存储该文件。


4.在Protocol Workshop模块中,点击上方“Edit Plate Setup”,设置反应板文件。
(1)首先在窗口的96孔模拟布局图中选择本次实验使用哪些孔、及对应的样品类型(sample type)。如果样品类型是标准品的话,还要输入其对应的量。

(2)点击“Fluorophores”, 设置样品的荧光基团种类
(3)给出样本布局文件名,点击‘Save this plate setup’,存储该文件。
(4)全部设置完成后,可点击“View Quantities/Identities”进行确认。然后点击右上角run with selected protocol,系统自动切换到 “Run Prep”窗口。
5.在“Run Prep”窗口,首先确认PCR热循环文件和反应板设置文件是否正确。然后:

(1)在“Sample volume is”文件框中输入反应体系的体积
(2)选择正确的反应板矫正方式。
A:“Use Persistent Well Factor”  使用仪器内部已存储的矫正数据。
B:“Collect Well Factors from experimental plate” 如果PCR反应采用Taqman或Molecular Beacon等探针,且每个孔中探针的浓度都一样, 则选择该选项。如果PCR反应采用SYBR Green I等DNA结合染料,则需在PCR反应液中加入一定浓度的荧光素(随机带Cat No. 170-8780,详细操作参见附件)。 
(3) 点击“Begin Run”键。
6.给本次的数据记录文件(opd文件)起名。
7.PCR循环开始后,系统会打开Run-Time Central模块对实验进行实时监控。当实验进行到荧光收集循环时,Data Analysis模块会自动打开,进行数据的收集和分析。
8.PCR反应结束后,在PCR Quantification窗口的“Select Analysis Mode”文件框中选择“PCR Base Line Subtracted” 或“PCR Base Line Subtracted Curve Fit”模式选项可得到各样品的Ct值。点击窗口上方的“PCR Standard Curve”切换进入PCR Standard Curve窗口,可得到本次实验的标准曲线。在标准曲线图下方的表格中显示着与其相关的数据,内容包括样品序号、样品类型(Type)、Ct值(Threshold Cycle)、起始模板量(Starting Quanity)等。
9.点击“Report”键,可输出结果报告单
10.实验结束后关闭MyIQ软件,光学及扩增系统电源,关闭电脑。