Whole-Gel-Eluter及Mini-Gel-Eluter全胶洗脱仪快速操作指南
信息来源:   时间:2015-07-13   点击次数:

Gel Eluter全胶洗脱仪通过电洗脱从整块的凝胶中洗脱和收集多个生物大分子条带。
安装
1.将底座放置于一水平桌面,用水平仪(随机附件)观察水平状况,可通过底座下的螺丝调节。装上下平板电极
2.将预先剪好尺寸的滤纸用洗脱缓冲液打湿,平放在下平板电极上
3.将预先剪好尺寸的玻璃纸(或透析纸)用洗脱缓冲打湿,放在滤纸上。用小滚筒(随机附件)去除气泡
4.放上洗脱槽模块,根据槽上数字(十字交叉)顺序拧紧螺丝
5.倒转整个模块,将在螺丝拧紧过程中挤出的多余缓冲液摇掉
6.在洗脱槽中倒入缓冲液,充满所有的小槽,小心去掉在槽内的气泡
7.戴上干净手套,将要洗脱的胶(凝胶先在洗脱缓冲液中平衡15-20min)放在一干净的水平面上,把切胶模板放置其上。切胶模板用来确定胶上要洗脱的部分。切胶模板是透明的,上有数字标尺,通过它可对齐染色前沿和分子量标准
8.小心用刀片下划,切下切胶模板内的凝胶。注意保证切下边缘齐平,这有助于提高实验的重复性,有了经验后,可以保证多次切取之间的高重复性
9.拿起切好的凝胶一边,小心放到洗脱槽内,保持蛋白条带和小槽是水平的。注意不要有气泡
10.将预先剪好尺寸的滤纸用洗脱缓冲打湿,放在胶上。用小滚筒去除气泡
11.吸去多余的缓冲液,擦干收集孔部分,封上封边带(随即附件)或透明胶带,封紧
12.放上上平板电极,轻轻合上卡锁
13.放上盖子,注意盖子只能在一个正确方向上合上
洗脱
14.将盖子的电源线和电泳仪连接,注意正负极(正对正,负对负)。
常用洗脱条件如下:
标准型(Whole Gel Eluetr)     恒流200-250mA     10-30min
    迷你型(Mini Gel Elueter)      恒流75-100mA      10-30min
    不同样品及洗脱缓冲液会影响最佳洗脱条件,需在实验中具体摸索
15.洗脱完成后关掉电源,反转电极方向(正对负)再运行10-15秒钟以去除吸附到玻璃纸上的蛋白
16.关闭电泳仪,拔出洗脱仪电极,注意不用打开洗脱仪
收集
17.轻轻撕去收集孔上封的胶带
18.准备好收集器,标准型用30个12x75mm试管,迷你型用14个1.5ml离心管(不带盖的),合上收集器盖,将收集器和一真空泵连接。
19.将收集器上的一排针插入洗脱仪左边的收集孔(不带数字标记),拧紧针边的两个螺丝
20.先完全打开真空控制阀,再打开真空泵,慢慢关上真空控制阀,以平稳地吸出洗脱液
21.如实验室没有真空泵,可进行手工收集。用合适大小的吸管,从洗脱仪右边的收集孔(带数字标记)轻轻吸取洗脱液
清洗

22.每次使用后立即用去污剂/蒸馏水彻底清洗洗脱仪和收集器