Model 422 胶洗脱仪
信息来源:   时间:2015-07-13   点击次数:

1.带上手套,将膜杯在60度洗脱缓冲中浸泡,至少1小时(可长);膜杯上的透析膜有两种:MW3500和MW12000D。膜杯可重复利用5次左右,用完后在含0.05% NaN3的洗脱缓冲液中放冰箱保存(洗脱DNA的膜杯不建议反复使用,因DNA易吸附在膜上)
2.将过滤板塞到玻璃管底部(磨沙面),使其底部齐平,套上白色接头(硅胶)
3.将玻璃管插入洗脱模块,可将洗脱模块的环孔处打湿,玻璃管较易插入,确保玻璃管上缘与环孔齐平;将不用的环孔用灰色小帽盖上
4.将浸泡好的膜杯插入硅胶接头,在接头内装满洗脱液,用枪头反复吸取洗脱液以去除透析膜上的气泡
5.在玻璃管内装满洗脱液,将要洗脱的凝胶放入管内。为增加回收率,可放入多个凝胶条带,一般凝胶高度为1cm,如超过1cm,需增加洗脱时间
6.将整个洗脱模块放入洗脱槽,加入约600ml下槽缓冲液,缓冲液液面必须没过接头上缘,否则透析膜上容易产生气泡。在上槽加入约100ml缓冲液。
7.在洗脱槽内放入一搅拌子,洗脱过程中剧烈搅拌可防止气泡产生
8.盖上洗脱槽盖子,接电泳仪(Bio-Rad PowerPac1000/3000/Basic/Universal,红对红,黑对黑接入)
9.洗脱,每管设电流为8-10mA,蛋白洗脱一般3-5hr,DNA一般
15min-1hr 
10.洗脱完成后关闭电泳仪,打开盖子(如洗脱的是DNA,在关闭之前反转电极再洗脱1min以防止DNA沾在透析膜上)。取下灰色小帽,将上槽缓冲漏掉,或小心取出一个玻璃管,漏掉上槽缓冲
11.小心而快速地用枪头吸去玻璃管内的缓冲液至过滤板,确保在整个过程中过滤板下溶液没有被搅动
12.小心取下整个接头和膜杯,用一新枪头,将膜杯内的液体吸出,体积约为400ul,加入200ul新鲜缓冲液,清洗膜杯后收集吸出。洗脱的样品在这约600ul的溶液里,回收率蛋白可达80-100%,核酸70-90%。
常用蛋白洗脱缓冲液配方:
Tris base     3.0g     25mM 
Glycine       14.4g    192mM 
SDS            1.0g     0.1% 
         加水至1L(4度保存) 
常用DNA洗脱缓冲液配方:
                     (50x)     使用浓度
Tris                 242g       40mM 
冰醋酸               57.1ml      20mM 
0.5MEDTA(pH8.0)   100ml        1Mm 
SDS                   5g          0.1% 
                      加水至1L