一. 安装制胶槽
1. 旋松夹子上的螺丝，把密封板拿掉，并把制胶槽面朝上置于桌子上。指旋螺丝应朝向天花板。
2. 把一片分隔板放进制胶槽中，插至制胶槽底部（确保在使用前把隔离板上的保护膜去掉）。
3. 把带垫片的玻板（长玻板）放在分隔板上面，使其垫条朝上。
4. 把短玻板放在长玻板的上面，要确保每添加一块玻板，都插至制胶槽底部。
5. 把分隔板放在短玻板上面，一个胶三明治结构即完成。
6. 重复3-5步骤，直至所有三明治结构斗组装好。
7. 当密封板放好后，为使三明治结构牢固，可用丙烯酸填充块填充制胶槽的剩余位置。如果制胶槽几乎装满三明治结构，可以用短玻板及分隔板填充至顶部。如果超过一块玻板用来填充剩余位置，则在玻板之间插入分隔板以便在胶聚合后分开玻板。
注意：为确保好的密封性，整摞玻板的顶部应该齐平于制胶槽的顶部，不能超过制胶槽顶部。如果制胶槽填充的过满，胶溶液会在灌制过程中发生泄漏，整摞玻板中会破裂。
8. 把垫圈紧密地安装在密封板的凹口中。
9. 把夹子的螺丝旋松，把密封板滑入制胶槽的夹子下，注意不要弄乱整摞结构。输入端口应该置于制胶槽底部的凹槽中。慢慢的旋紧螺丝直至旋紧。
10. 把制胶槽立起来，把它放在一个水平的桌面上。不要把制胶槽的面向下放置。
二. 灌胶
单一浓度的胶可以从制胶槽的顶部或底部灌制。梯度胶必须从底部灌制。
第一次灌制某一厚度的胶时，有必要先确定需要的凝胶体积。可在安装好制胶槽后，通过活塞注入合适体积的水，测定水的体积，准备该体积（+5ml）的凝胶溶液。
（1）从顶部灌胶（非梯度胶）
1. 把活塞阀接到制胶槽的输入端口。确保阀门在关闭位置。
2. 用笔在制胶槽外面做一个标记，标出分离胶的高度。
3. 除催化剂（APS和TEMED）外，把所有的试剂进行混合并在真空下脱气至少15分钟。
4. 脱气后，加入催化剂，用枪头或大的针头把溶液从玻板的中间加入。制胶槽底部的凹槽将平均分布溶液至各三明治结构中。通过观察远端三明治结构中溶液升起的水平面来监测灌胶的过程。在达到所需的胶高度时停止灌胶。
5. 如果需要灌制积层胶，则加入覆盖液，否则立即插入梳子。
6. 在胶充分聚合（约1小时）后，倒掉覆盖液。
7. 准备积层胶溶液并灌制积层胶。
8. 在各三明治结构中插入梳子（以一定角度插入梳子以避免气泡的形成）。
注意：您也可以从底部灌制单一浓度的胶。通过在梯度生成仪的两个储存槽中加入单一浓度的溶液即可。
（2）从底部灌制梯度胶
Mini-PROTEAN 3多板凝胶灌胶器的输入端口可用来灌制线性和凸形丙烯酰胺梯度胶。我们推荐结合使用485梯度生成仪（165-4120）来进行多快胶的灌制。建议初学者提前练习所有的步骤。
1. 把梯度生成仪放在磁性搅拌器上并在标有“light”的混合槽中加一个磁性搅拌子。连接连接器与输入端口的活塞阀。在连接器上接一段聚乙烯管子（1/8″ ID）连接梯度生成仪与多板凝胶灌胶器。
2. 确定所需溶液的体积。
请参见附录。
3. 除催化剂（APS和TEMED），把所有的试剂进行混合并在真空下脱气至少15分钟。
4. 在灌胶前加入TEMED和APS，轻柔混合并在梯度槽中倒入合适体积的溶液（请参照485梯度生成仪手册）。“light”溶液（低浓度丙烯酰胺）要倒入标有“light”的混合槽中，“heavy”溶液要倒入标有“heavy”储存液中。
5. 打开混合槽中搅拌子，打开梯度生成仪的管状夹和制胶槽的活塞阀，开始灌胶。
注意：如果重力流的流速不够快，可使用蠕动泵在10分钟内完成操作。如果从加入催化剂开始的10分钟内不能完成操作，则需要减少催化剂的用量（1/2的TEMED的量）来降低聚合速度。要快速完成灌胶，灌胶后不要摇晃制胶槽中的胶溶液。
三. 制胶槽拆卸及胶的保存
1. 丙烯酰胺聚合至少约需1个小时。
2. 旋松夹子上的螺丝，小心地拿掉密封板。
3. 把胶每次一个地从整摞结构中取出，把胶三明治与充当填充物的丙烯酸填块和分隔板分开。
4. 用蒸馏水冲洗掉所有的顶部胶。用刀片修剪掉玻板周围多余的丙烯酰胺胶，并用水冲掉多余的残胶。
5. 把胶垂直地保存于密封容器或密封袋中，在容器的底部和胶的顶部加入几毫升的1倍缓冲液（与制胶缓冲液相同）以阻止胶变干。胶在密封条件下在4度进行保存。
6. 用蒸馏水彻底清洗制胶槽。可用注射针头清除掉活塞阀门和输入端口的残胶。
四. 使用Mini-PROTEAN 3电泳槽或Mini-PROTEAN 3 Dodeca电泳槽进行电泳
1. 把胶从储藏容器中取出。灌制积层胶（如果需要），放置30-60分钟待胶聚合。
2. 把胶插入电泳槽的电泳芯中。参照Mini-PROTEAN 3电泳槽或Mini-PROTEAN 3 Dodeca电泳槽的手册进行电泳槽作。

附录：12块Mini[PROTEAN 3胶制胶体积估算
胶的厚度                     12快胶的体积                所需准备的胶的体积
0.5mm                        70ml                        75-80ml
0.75mm                       80ml                        85-90ml
1.0mm                        100ml                       105-110ml
1.5mm                        140ml                       145-150ml
以1.0mm 4-20%梯度胶为例说明胶体积的计算过程：
制作12块1.0mm需要100ml的胶，要准备110ml胶溶液。把110ml的胶平均分至两个槽中，即55ml于“light”槽中，55ml于“heavy”槽中。
胶体积的计算：
Light溶液（4%）
丙烯酰胺
30%储备胶
（30%）（Xml）=（4%）（55ml）                 X=7.3ml
Tris-Cl缓冲液
1.5M Tris-Cl储备缓冲液 pH8.8
（1.5M）（Xml）=（0.375M）（55ml）             X=13.8ml
水
（55ml）-（7.3ml+13.8ml）=X                    X=34ml
APS
10%储备液
（500μl）/（100ml）=（X μl）/（55ml）           X=275μl
TEMED
为APS体积的10%；（275μl）/10=X              X=27.5μl
Heavy溶液（20%）
丙烯酰胺
30%储备胶
（30%）（Xml）=（20%）（55ml）                 X=36.7ml
Tris-Cl缓冲液
1.5M Tris-Cl储备缓冲液 pH8.8
（1.5M）（Xml）=（0.375M）（55ml）             X=13.8ml
水
（55ml）-（36.7ml+13.8ml）=X                    X=4.5ml
APS
10%储备液
（500μl）/（100ml）=（X μl）/（55ml）           X=275μl
TEMED
为APS体积的10%；（275μl）/10=X              X=27.5μl