475梯度形成仪快速操作指南
信息来源:   时间:2015-07-10   点击次数:

1.梯度形成仪结构图见下:

2.线形梯度胶的灌制
A.垂直梯度胶的灌制
(1)参考DCode系统安装垂直梯度胶三明治结构。
(2)剪取三根聚乙烯管,其中两根长度为15.5cm,另一根长9cm。将短的一根与Y型接头连接,两根长的与小套管连接,并连在10ml或30ml的注射器上。
(3)在两个注射器上分别标记“高浓度”与“低浓度”。把活塞头放置在活塞帽的中间并旋紧。把活塞插入针管。把针管推至针筒中间位置,针筒刻度朝外。确保两侧的针筒位于相同的水平位置。
(4)逆时针旋转凸轮至起始位置。为设置理想的传送体积,旋松体积调节旋钮。把体积设置显示器装置固定在注射器上并调整到目标体积设置,旋紧体积调整旋钮。如7.5×10cm的胶(1mm厚),要把体积设置在4.5处。不同体积胶的体积设置请参见下表:



(5)在试管或离心管中配置合适体积的高变性浓度和低变性浓度丙烯酰胺溶液。下面步骤对时间要求严格,以下步骤需在7-10分钟之内完成。
(6)在高变性浓度丙烯酰胺溶液中加入0.09%(V/V)终浓度的过硫酸铵和TEMED。该后盖子后颠倒数次来混匀。用针筒从离心管中或试管中吸取所有的溶液。低变性浓度丙烯酰胺的处理与高变性浓度丙烯酰胺的相同。
(7)推动注射器推动杆赶走气泡,把凝胶溶液推至针筒末端,不要把凝胶推出针筒以防配置的胶体积不够。
(8)分别正确地把低浓度和高浓度针筒放置在传送装置的两侧固定好。
(9)将与注射器相连的软管的两端分别和Y型接头的两个头相连,把9cm的软管一段与Y型接头相连。9cm软管的另一端与三明治结构的活塞相连。确保活塞是打开的,三明治结构的通气孔是开放的。缓慢并平稳的旋转凸轮来输送凝胶溶液。
(10)凸轮旋到底时,把三明治结构的通气孔堵上,关上活塞。旋松倾斜杆旋钮,小心的把胶三明治放平。此操作对正确的制作垂直梯度胶及其重要。
(11)立即把软管从三明治装置的活塞上取下,迅速清洗用完的设备。
(12)胶约聚合60分钟。制作另半块7.5×10cm胶时,把倾斜杆取下,装到另一边,用同样方法制胶。
(13)在胶聚合后,小心的按垂直方向拿掉梳子。
B.水平胶的灌制
(1)参考DCode系统安装水平梯度胶三明治结构。把胶装置正直放在桌上。
(2)剪取三根聚乙烯管,其中两根长度为15.5cm,另一根长9cm。将短的一根与Y型接头连接,两根长的与小套管连接,并连在10ml或30ml的注射器上。
(3)在两个注射器上分别标记“高浓度”与“低浓度”。把活塞头放置在活塞帽的中间并旋紧。把活塞插入针管。把针管推至针筒中间位置,针筒刻度朝外。确保两侧的针筒位于相同的水平位置。
(4)逆时针旋转凸轮至起始位置。为设置理想的传送体积,旋松体积调节旋钮。把体积设置显示器装置固定在注射器上并调整到目标体积设置,旋紧体积调整旋钮。
(5)在试管或离心管中配置合适体积的高变性浓度和低变性浓度丙烯酰胺溶液。下面步骤对时间要求严格,以下步骤需在7-10分钟之内完成。
(6)在高变性浓度丙烯酰胺溶液中加入0.09%(V/V)终浓度的过硫酸铵和TEMED。该后盖子后颠倒数次来混匀。用针筒从离心管中或试管中吸取所有的溶液。低变性浓度丙烯酰胺的处理与高变性浓度丙烯酰胺的相同。
(7)推动注射器推动杆赶走气泡,把凝胶溶液推至针筒末端,不要把凝胶推出针筒以防配置的胶体积不够。
(8)分别正确地把低浓度和高浓度针筒放置在传送装置的两侧固定好。

(9)将与注射器相连的软管的两端分别和Y型接头的两个头相连,把9cm的软管一段与Y型接头相连,另一端与一个规格为19的针头连接。把针头的斜面一边放置于胶三明治的顶部中间,针头可插入玻板之间。

(10)缓慢并平稳的旋转凸轮来输送凝胶溶液。
(11)小心的插入梳子至合适的高度。胶聚合约60分钟。
(12)把软管从三明治装置的活塞上取下,迅速清洗用完的设备。
(13)在胶聚合后,小心的按垂直方向拿掉梳子。