Trans-BlotSD半干转印槽快速操作指南
信息来源:   时间:2015-07-09   点击次数:

半干转印槽用于快速高效的蛋白和核酸的转印。
1.准备好转印缓冲液(参看说明书,不同样品缓冲配方不同),把凝胶在缓冲中平衡20-60分钟
2.剪好合适尺寸的转印膜,在缓冲中浸5-10分钟
3.剪好合适尺寸的滤纸(2张增厚滤纸或4张厚滤纸或6张薄滤纸)用缓冲液浸湿
4.在阳极平板上根据图中顺序做好转印三明治,注意不能有气泡
5.装好阴极平板,合上安全盖
6.接上合适的电泳仪开始转印。注意电极连接(正对正,负对负)
根据不同的蛋白摸索合适的转印条件。常规推荐
小胶用10 V 30 minutes 或15 V 15 minutes.
大胶用25 V 30 minutes 或15 V 60 minutes.
注意大胶不要超过 25 V电压和 3 mA/cm2电流 ,小胶电流不要超过 5.5 mA/cm2
7. 关闭电泳仪,打开安全盖和阴极电极,取出转印膜
注:对于一些用酸性缓冲液的转印,需把凝胶放在膜上,其他同上

常见缓冲液配方:
Towbin 缓冲(SDS蛋白,硝酸纤维素膜,Zeta-Probe膜):25mM Tris,192mM Glycine(20%methanol), pH8.3

DNA转印缓冲(Zeta-Probe膜):0.5xTBE